前几天看刚刚到关于新疆切糕赔偿金的新闻，一车切糕16万，惹来一片切糕热。后厦门涉及部门检验3份切糕样本。3份检品中，菌落总数根据国家《糕点、面包卫生标准》，分别微克17倍、1.6倍、10倍，大肠菌群分别微克152倍、366倍、366倍。
切糕价难得，安全性要第一。 现共享切糕等食品类大肠杆菌的SN检验方法 切糕样品制取： 以无菌操作所取25g切糕样品,放进装有225mL稀释剂的消毒均质杯内,于8000r/min均质1~2min,做成1:10样品烘液(也能用消毒乳钵研磨的方法替换)。 溶解样品烘液根据对样品污染情况的估算,用稀释剂将样品烘液做成一系列十倍递减的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4。从制取样品烘液至溶解完,全过程不得多达15min。
LST和EC可行性检验： 对每个样品,自由选择适合的三个倒数溶解度的样品稀释液。每个溶解度疫苗三管月桂恩硫酸盐胰蛋白(月必)(LST)肉汤,每管疫苗1mL。将疫苗管置放361℃培育482h。 仔细观察试管的产气情况： 检查推倒管内否有气泡产生,用直径为3mm的疫苗环将所有482h内产气的LST肉汤管培育物移种于EC肉汤管中。
将所有疫苗的EC肉汤管在30min内放进带盖44.50.5℃水浴箱内,培育482h。 所取其产气管的培育物划线疫苗于伊红美绿(EMB)平板,361℃培育242h。
检查平板上若无不具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。 如有典型菌落,则从每个平板上最少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上最少挑取2个怀疑菌落。用疫苗针认识菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,361℃培育18~24h。 生化试验： 将斜面培育物移种到下列培养基中展开生化试验。
1色氨酸肉汤：在361℃培育242h后,特Kovacs氏试剂0.2~0.3mL,上层经常出现红色为靛基质阳性反应。 2MR-VP培养基：在361℃培育482h。以无菌操作移取培育物1mL至13mm100mm试管中,特5％-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如经常出现伊红色,为VP试验阳性。 将MR-VP培育物的剩下部分再行培育48h滴加5液甲基白溶液。
如培育物变红色,为甲基白试验阳性,若变黄色则为阴性反应。 3Koser氏枸椽酸盐肉汤：于361℃培育96h记录若无生长。 4LST肉汤：于361℃培育482h,仔细观察试管中否产气。
5革兰氏染色：所取18h营养琼脂斜面培育物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。
大肠杆菌与非大肠杆菌生化辨别如下：━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━靛基质┃MR┃VP┃枸椽酸盐┃检验(型别)━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━＋┃＋┃－┃－┃典型大肠杆菌－┃＋┃－┃－┃非典型大肠杆菌━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━＋┃＋┃－┃＋┃典型中间型－┃＋┃－┃＋┃非典型中间型━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━－┃－┃＋┃＋┃典型产气肠杆菌＋┃－┃＋┃＋┃非典型产气肠杆菌━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━如经常出现下诏以外的生化反应类型,指出培育物有可能不显,不应新的划线分离出来,适当时做到反复试验。结果报告： 大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,烘烤乳糖产酸产气,IMViC试验为＋＋－－或－＋－－,再行根据LST肉汤阳性管数坎MPN表格,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。
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